病毒樣顆粒（Virus like particles，VLPs），由于具有安全性高，在結(jié)構(gòu)上與病毒粒子相似，可通過(guò)與病毒粒子相同的途徑激起免疫系統(tǒng)的有效應(yīng)答等優(yōu)點(diǎn)，近二十年來(lái)在人用、獸用疫苗及藥物遞送系統(tǒng)中的應(yīng)用越來(lái)越受到關(guān)注。
賽分科技客戶中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所和中科院過(guò)程所在《生物工程學(xué)報(bào)》雜志發(fā)表文章，文中采用賽分科技體積排阻色譜SRT SEC-500建立病毒樣顆粒疫苗及豬圓環(huán)病毒2型滅活疫苗的檢測(cè)方法，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。
背景介紹
疫苗中抗原含量直接影響疫苗的免疫效果。滅活病毒疫苗及VLP 疫苗中的抗原通常具有復(fù)雜的顆粒結(jié)構(gòu)。常用的酶聯(lián)免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)等方法往往難以區(qū)分不同顆粒結(jié)構(gòu)的抗原。通過(guò)高效體積排阻色譜(high-performance size-exclusion chromatography，HPSEC)和多角度激光散射儀(multi-angle laser light scattering, MALLS)聯(lián)用可以獲取生物樣品中的顆粒直徑分布、分子質(zhì)量及分布、顆粒的聚集情況等信息，是對(duì)現(xiàn)有的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)法和ELISA 方法有力的技術(shù)補(bǔ)充。該方法高效便捷、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，已在口蹄疫疫苗的質(zhì)控中被廣泛應(yīng)用。
豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus, PCV2) 是圓環(huán)病毒科(Circoviridae)圓環(huán)病毒屬成員，是迄今發(fā)現(xiàn)的脊椎動(dòng)物最小的DNA病毒之一。經(jīng)研究證明PCV2 能引發(fā)多種癥狀，如斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎和腎病綜合征、豬呼吸道疾病綜合征等，導(dǎo)致豬群出現(xiàn)大批量死亡，對(duì)畜牧業(yè)經(jīng)濟(jì)造成了嚴(yán)重威脅，疫苗是最為有效防治PCV的措施，對(duì)于克制病毒至關(guān)重要。現(xiàn)今，PCV2 疫苗產(chǎn)品沒(méi)有統(tǒng)一的效力評(píng)價(jià)和相應(yīng)種類抗原含量的評(píng)價(jià)方法，因而開(kāi)發(fā)出疫苗檢測(cè)的準(zhǔn)確、通用的方法對(duì)于評(píng)價(jià)現(xiàn)有的疫苗產(chǎn)品質(zhì)量具有重要意義。
文章概述
文章采用賽分科技體積排阻色譜柱SRT SEC-500建立HPSEC-MALLS檢測(cè)豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）疫苗抗原檢測(cè)方法。以純化的PCV2滅活病毒及VLP為參照，對(duì)4家生產(chǎn)企業(yè)的2種PCV2滅活病毒疫苗(a、b)及VLP疫苗(c、d)破乳后進(jìn)行HPSEC-MALLS檢測(cè)及分子量分析；結(jié)合PCV2 抗原檢測(cè)卡、Western blotting 和透射電子顯微鏡(transmission electron microscope, TEM)，鑒定了特征色譜峰；考察了方法的重復(fù)性和檢測(cè)線性。經(jīng)初步驗(yàn)證，該方法有望成為一種準(zhǔn)確、高效的PCV2疫苗的體外評(píng)價(jià)方法，用于質(zhì)量評(píng)價(jià)與提升。
HPSEC-MALLS檢測(cè)
樣品：采用上述色譜條件對(duì)破乳后的水相抗原進(jìn)行檢測(cè)。
流動(dòng)相：50 mmol/L pH 7.4 磷酸緩沖液，含0.1 mmol/L 硫酸鈉；
進(jìn)樣體積：100 μL；
流速：0.6 mL/min；
檢測(cè)器：UV檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，MALLS檢測(cè)器（λ=690 nm），示差檢測(cè)器（RID）依次串聯(lián)；
數(shù)據(jù)處理：樣品相對(duì)分子量通過(guò)ASTRA 軟件(Wyatt Technology, USA)計(jì)算獲得。
圖1 HPSEC-MALLS 檢測(cè)色譜圖
(A)PCV2 滅活病毒參照品 (B)CAP VLP 抗原參照品
圖2 HPSEC-MALLS檢測(cè)PCV2滅活疫苗及VLP 疫苗破乳后的水相抗原分子量分布與色譜圖
(A)疫苗a. (B) 疫苗b. (C) 疫苗c. (D) 疫苗d.
圖3 HPSEC 檢測(cè)(A)疫苗d 及(B)Cap VLP 抗原參照品三次重復(fù)性檢測(cè)的色譜圖
圖4 Cap VLP 純化抗原中VLP及多聚體的HPSEC檢測(cè)的峰面積與蛋白濃度的線性相關(guān)性
(A) CapVLP 抗原參照品梯度稀釋色譜圖。
(B) VLP 及VLP 聚集體的HPSEC 檢測(cè)峰面積與抗原蛋白濃度的線性回歸曲線
結(jié)論
文章采用賽分科技SRT SEC-500體積排阻色譜柱建立病毒樣顆粒疫苗及PCV2 型滅活疫苗的檢測(cè)方法。通過(guò)HPSEC 可實(shí)現(xiàn)快速定量分析PCV2 病毒樣顆粒疫苗中的組裝體及其聚集體組成，并且方法學(xué)驗(yàn)證表明該方法具有很好的重復(fù)性和檢測(cè)線性，有望成為一種準(zhǔn)確、高效的PCV2 疫苗的體外評(píng)價(jià)方法，作為現(xiàn)有方法的補(bǔ)充，在疫苗的質(zhì)量監(jiān)管及提升中發(fā)揮作用。
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[1] 徐嫄，楊延麗，鄒興啟，等．應(yīng)用高效體積排阻色譜偶聯(lián)多角度激光散射鑒定豬圓環(huán)病毒2 型滅活疫苗及病毒樣顆粒疫苗抗原[J/OL]．生物工程學(xué)報(bào). https://doi.org/10.13345/j.cjb. 210937
