近期，可口可樂公司在橙汁中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)許可的殺菌劑，并向美國食品與藥物管理局(FDA)報告。此次檢出殺菌劑多菌靈的橙汁，原料橙來自巴西，當(dāng)?shù)囟嗑`多用于殺滅霉菌，但實(shí)驗(yàn)時發(fā)現(xiàn)，該物質(zhì)有導(dǎo)致動物肝癌病變的高風(fēng)險。這一事件引發(fā)了外界對中國橙汁飲料食品安全的擔(dān)憂。中國是巴西橙汁第四大進(jìn)口國，據(jù)悉，中國市場現(xiàn)售的熟知品牌橙汁，不同程度地兌入了巴西橙汁。
目前，國內(nèi)對于果汁中多菌靈的檢測主要依據(jù)SN/T 1753-2006《進(jìn)出口濃縮果汁中噻菌靈、多菌靈殘留檢測方法高效液相色譜法》，賽分科技日前建立了采用QuEChERS和LC/MS/MS檢測橙汁中多菌靈的方法，不僅操作上更加快速簡單，而且大大提高了目標(biāo)物質(zhì)的檢出限（多菌靈檢測限達(dá)到ppb級）。
采用QuEChERS和LC/MS/MS方法檢測橙汁中的多菌靈
產(chǎn)品描述
| ECQUEU750CT-MP | 50 mL離心管，每袋包含4 g MgSO4，1g NaCl，500 mg 檸檬酸二鈉和1 g 檸檬酸三鈉 |
| CUMPSC18CT | 2mL微離心管裝有150 mg無水硫酸鎂、50 mg PSA、50 mg封尾C18 |
一、樣品前處理
1. 向50mL離心管中加入10 mL橙汁，渦流混均、平衡15 min。
2．加入10 mL乙腈混合。加入鹽包 (ECQUEU750CT-MP)，劇烈振蕩1min，然后在20 ºC，5000 rpm轉(zhuǎn)速下離心5 min。下面是經(jīng)過QuEChERS提取后的樣品圖片，上層是乙腈提取液。
3．移取1 mL提取液至裝有150 mg無水硫酸鎂、50 mg PSA、50 mg封尾C18的2 mL微離心管中（CUMPSC18CT）
4. 振搖1 min后在10000 rpm轉(zhuǎn)速下離心5 min。移取 0.5 mL提取液至2 mL自動進(jìn)樣瓶。加入25 μL 1 ppm 三苯基磷酸酯（TPP），然后進(jìn)行LC/MS/MS分析。
二、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件
色譜柱: Sepax HP-C18, 2.1 x 100 mm, 3 μm, 120 Å
柱溫: 室溫
進(jìn)樣體積: 10 μL (15 ºC)
流動相: A: 0.1% 甲酸溶液；B:含 0.1% 甲酸的甲醇溶液
流速: 200 μL/min
| 流動相梯度程序 | ||
| 時間(min) | %A | %B |
| 0 | 50 | 50 |
| 3 | 0 | 100 |
| 8 | 0 | 100 |
| 9 | 50 | 50 |
| 14 | 50 | 0 |
電離模式: 電噴霧離子源（ESI）
離子極化方式：正離子 ESI
電噴霧電壓: 3000 V
霧化氣壓力 (N2): 40 psi
輔助氣(N2)壓力: 10 psi
離子傳輸毛細(xì)管溫度: 350 °C
掃描方式: 選擇反應(yīng)監(jiān)測（SRM, 0-10 min)
碰撞誘導(dǎo)裂解（CID）條件: 1.5 mTorr 氬氣
SRM模式下監(jiān)測的躍遷過程如下：
| 化合物 | 母離子 | 子離子1 | 碰撞能量(CE) | 子離子2 | 碰撞能量(CE) | S-Lens | 駐留時間（s） |
| 多菌靈 | 92.093 | 132.080 | 29 | 160.080 | 17 | 81 | 0.2 |
| TPP（內(nèi)標(biāo)） | 327.093 | 77.020 | 37 | 152.070 | 33 | 98 | 0.10 |
三、數(shù)據(jù)分析及實(shí)驗(yàn)結(jié)果
多菌靈的基質(zhì)匹配校準(zhǔn)曲線：
線性范圍是2-500 ng/mL，R2 =0.9992。檢出限（LOD）和定量限(LOQ)分別是0.4 和1.4 ng/mL。
多菌靈的準(zhǔn)確度和精密度數(shù)據(jù)
| 加標(biāo)濃度（ng/mL） | 回收率（%） | RSD%(n=4) |
| 10 | 96.6 | 4.5 |
| 50 | 100.2 | 3.4 |
| 250 | 103.7 | 2.1 |
按照優(yōu)化的方法，對三家知名品牌的橙汁進(jìn)行了檢測，結(jié)果見下表：
| 樣品 | 樣品描述 | 檢測到的多菌靈含量 |
| 樣品1 | 100% 鮮橙汁-品牌A | < 1.4 ng/mL |
| 樣品2 | 橙汁-品牌B | < 1.4 ng/mL |
| 樣品3 | 含果粒的橙汁-品牌B | 5.3 ng/mL |
| 樣品4 | 純果樂（低酸）-品牌C | < 1.4 ng/mL |
| 樣品5 | 橙汁-品牌B | < 1.4 ng/mL |
| 樣品6 | 純果樂（含一些果粒）-品牌C | < 1.4 ng/mL |
這六種橙汁樣品每種平行測定3次。僅在樣品3（含果粒的橙汁-品牌B）中檢出多菌靈，含量為5.3 ng/mL，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于歐盟規(guī)定的最大允許量 200 ppb。圖1為空白樣品3（a）和加標(biāo)樣品3 (50 ng/mL)中多菌靈的色譜圖。
附件下載